科研 人蓬亂蛋白Dsh同源物3（DVL3）定量檢測試劑盒

產(chǎn)品品牌：睿信生物 商品貨號：RX2D2037626

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說明書
  • 產(chǎn)品售價： 2800/2000
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反應(yīng)種屬  人
檢測范圍  0.25—8 ng/mL
物理性能 試劑盒的各液體組分應(yīng)澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應(yīng)真空包裝，無破損漏氣。
用途  定量檢測血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等樣本中人蓬亂蛋白Dsh同源物3 （DVL3）的濃度。
實驗原理  本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。在預(yù)包被抗人蓬亂 蛋白Dsh同源物3（DVL3）抗體（固相抗體）的微孔酶標(biāo)板中，加入人蓬亂蛋白 Dsh 同源物3（DVL3）校準(zhǔn)品和待測樣本，再加入另一株HRP標(biāo)記的抗人蓬亂蛋 白Dsh同源物3（DVL3）抗體（酶標(biāo)抗體），經(jīng)過溫育與充分洗滌，去除未結(jié)合 的組分，在微孔板固相表面形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體的夾心復(fù)合物。加底 物A和B，底物在HRP催化下，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，在終止液（2M 硫酸）作用下， 最終轉(zhuǎn)化為黃色，在酶標(biāo)儀450nm波長上測定吸光度（OD值），吸光度（OD值） 與待測樣品中人蓬亂蛋白Dsh同源物3（DVL3）的濃度正相關(guān)。擬合校準(zhǔn)品曲線， 可以計算出樣本中人蓬亂蛋白Dsh同源物3（DVL3）的濃度。
特異性  結(jié)構(gòu)類似物無交叉
重復(fù)性 板內(nèi)變異系數(shù)均<10%，板間變異系數(shù)均<15%。
回收率 回收率在 85%-115%之間。
試驗所需自備試驗器材 1、酶標(biāo)儀（450nm）
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動洗板機
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml 量筒
操作程序 所有試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品，建議做復(fù)孔。
1、按前面說明書描述的方法，配制好試劑盒各種組分的工作液。
2、從鋁箔袋中取出所需板條，剩余的板條用自封袋密封放回冰箱。
3、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、0 值孔、空白孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL，0 值孔加樣本稀釋液 50μL，空白孔不加，樣本孔加待測樣本 50μL。
4、除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔、0 值孔和樣本孔，加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體 100μL。
5、用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光孵育 60min。
6、揭開封板膜，棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 20S，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù) 5 次。若使用自動洗板機，請按洗板機操作程序進(jìn)行洗板，添加浸泡 30s 的程序，可以提高檢測的精度。洗板結(jié)束，加底物前，要在干凈不掉屑的紙上，充分拍干反應(yīng)板。
7、將底物 A 和 B 按 1:1 體積充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜蓋住反應(yīng)板，37℃水浴鍋或恒溫箱避光孵育 15min。
8、所有孔加入終止液 50μL，在酶標(biāo)儀 450nm 波長上讀取各孔吸光度（OD 值）。
注意事項 1：如果試劑盒的組份需要再次使用，請確保上一次使用之后沒有被污染。
2：酶標(biāo)板單次未使用完，要謹(jǐn)記密封放到 2-8℃保存。
問題分析 ①問題描述：標(biāo)準(zhǔn)曲線差
可能原因及相應(yīng)對策：
1.試劑盒平衡時間不夠——不低于 2 個小時的室溫平衡
2.吸取及洗滌不充分——充分的吸取及洗滌
3.移液不精確——檢查和校正移液器
②問題描述：精密度低
可能原因及相應(yīng)對策：
1.洗滌不充分——按說明書要求充分洗滌和浸泡
2.混勻不充分和吸取試劑不足——充分混勻和吸取試劑
3.重復(fù)利用吸頭、容器和覆膜——使用加樣器要更換新的吸頭、使用新的封板模
4.加樣不精確——檢查和校正移液器
③問題描述：O.D值低
可能原因及相應(yīng)對策：
1.每孔加的試劑量不精確——校正移液器，精確加入試劑
2.溫育時間不正確——保證充足的溫育時間
3.溫育溫度不正確——試劑要平衡至室溫并保證準(zhǔn)確的溫育溫度
4.酶標(biāo)記物或底物失效——通過混合酶標(biāo)記物和底物，顏色迅速顯現(xiàn)來檢查
5.沒有加入終止液——按照說明書實驗操作步驟加入終止液
6.超出讀數(shù)時間讀數(shù)——在說明書推薦的讀數(shù)時間內(nèi)讀數(shù)
④問題描述：樣本值
可能原因及相應(yīng)對策：
1.不正確的樣本儲存方式——正確儲存樣本，使用新鮮樣本進(jìn)行實驗
2.不正確的樣本收集和處理方法——采取正確的樣本收集和處理方法
3.待測物質(zhì)在樣本中含量低——使用新鮮樣本，重復(fù)實驗
聲明 該試劑盒僅供研究使用，如將其用于臨床診斷或任何其他用途，我公司將不對因此產(chǎn)生的問題負(fù)責(zé)，亦不承擔(dān)任何法律責(zé)任。

 ELISA試劑盒常見問題與解析

ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗）作為實驗室的“金牌檢測員”，在疾病診斷、生物標(biāo)志物檢測、藥物研發(fā)等領(lǐng)域大顯身手。但再成熟的技術(shù)，也可能因為一個小細(xì)節(jié)“鬧脾氣”——標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合不佳、信號忽高忽低、背景噪音干擾……別擔(dān)心！睿信生物憑借多年ELISA研發(fā)經(jīng)驗，幫你揪出問題根源，讓實驗數(shù)據(jù)穩(wěn)穩(wěn)當(dāng)當(dāng)！

一、ELISA實驗常見問題大盤點

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線“翻車”——擬合度差、線性不佳

問題表現(xiàn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線的R²值低于0.99，甚至出現(xiàn)“S”形或雜亂無章的趨勢。
可能原因：

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯誤（梯度沒做好或混勻不充分）。

標(biāo)準(zhǔn)品反復(fù)凍融導(dǎo)致降解。

酶標(biāo)板洗滌不徹底，孔間殘留液體影響吸光度。
解決方案：

標(biāo)準(zhǔn)品現(xiàn)配現(xiàn)用，避免多次凍融，稀釋時嚴(yán)格按說明書操作。

確保洗滌步驟規(guī)范，洗板機噴嘴無堵塞，手工洗板時甩干并拍干。

如果曲線仍不理想，嘗試更換標(biāo)準(zhǔn)品或檢查酶標(biāo)儀波長是否準(zhǔn)確。

 

2. 信號值太低——目標(biāo)蛋白“隱身”了？

問題表現(xiàn)：樣本OD值接近空白孔，無法有效檢測目標(biāo)蛋白。
可能原因：

樣本中目標(biāo)蛋白濃度過低（低于檢測下限）。

抗體失效或孵育時間/溫度不足。

樣本處理不當(dāng)（如反復(fù)凍融、未加蛋白酶抑制劑）。
解決方案：濃縮樣本（超濾離心）或換用高靈敏度ELISA試劑盒。

檢查抗體有效期，確保孵育時間充足（可適當(dāng)延長）。

新鮮樣本優(yōu)先，避免反復(fù)凍融，必要時添加保護劑。

3. 背景信號高——全是“噪音”怎么辦？

問題表現(xiàn)：空白孔或陰性對照OD值偏高，影響結(jié)果判讀。
可能原因：

封閉不充分（封閉液選擇不當(dāng)或時間不足）。

抗體交叉反應(yīng)或非特異性結(jié)合。

洗滌不徹底，殘留試劑導(dǎo)致假陽性。
解決方案：

優(yōu)化封閉條件（常用BSA或脫脂奶粉，封閉時間可延長至1-2小時）。

增加洗滌次數(shù)（如從3次增至5次），確保每孔洗滌液加滿。

更換特異性更高的抗體，或調(diào)整一抗/二抗稀釋比例。

4. 重復(fù)性差——同一樣本結(jié)果忽高忽低

問題表現(xiàn)：同一批樣本檢測，孔間差異大，CV值超過20%。
可能原因：

加樣操作不一致（手法、速度差異）。

酶標(biāo)板邊緣效應(yīng)（邊緣孔蒸發(fā)快，溫濕度不均）。

試劑未平衡至室溫直接使用。
解決方案：

使用多通道移液器，統(tǒng)一加樣速度和角度。

孵育時覆蓋板蓋，避免邊緣孔干燥，可棄用邊緣孔作空白。

所有試劑使用前室溫平衡30分鐘，避免溫度差異影響反應(yīng)效率。

二、ELISA實驗小貼士：細(xì)節(jié)決定成敗

1.樣本處理：血清/血漿避免溶血，細(xì)胞裂解液需離心去除碎片，組織樣本勻漿充分。

1. 

2.試劑保存：抗體、酶結(jié)合物等按說明書要求保存（-20℃分裝避免反復(fù)凍融）。

3.儀器校準(zhǔn)：定期檢查移液器準(zhǔn)確性，酶標(biāo)儀做波長和光路校準(zhǔn)。

4.對照設(shè)置：每板必設(shè)空白孔、陰性對照和陽性對照，監(jiān)控系統(tǒng)誤差。

三、遇到問題別慌！ELISA排查流程圖

如果實驗結(jié)果異常，可以按以下步驟快速排查：

檢查試劑：是否過期？是否正確保存？

 

回顧操作：孵育時間、溫度、洗滌步驟是否規(guī)范？

 

分析數(shù)據(jù)：標(biāo)準(zhǔn)曲線是否正常？對照是否符合預(yù)期？

 

重復(fù)實驗：換新試劑或調(diào)整條件后重試。

ELISA雖然操作簡單，但“細(xì)節(jié)魔鬼”常常藏在加樣、洗滌、孵育這些基礎(chǔ)步驟里。遇到問題時，耐心對照說明書、排查關(guān)鍵環(huán)節(jié)，往往能事半功倍。如果反復(fù)失敗，不妨聯(lián)系試劑盒技術(shù)支持——畢竟，好的實驗結(jié)果=靠譜的試劑+規(guī)范的操作+一點點的運氣！

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