「助研大禮包」CCK8試劑盒免費(fèi)領(lǐng)啦！

發(fā)布時(shí)間：2025/3/12 9:44:49      閱讀次數(shù)：76

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CCK8 試劑盒
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一 實(shí)驗(yàn)原理

 

CCK-8(Cell Counting Kit-8)是一種基于水溶性四唑鹽(WST-8)的高靈敏度細(xì)胞活性檢測方法.其核心原理是：活細(xì)胞線粒體內(nèi)的脫氫酶可將WST-8還原為橙黃色甲臜(Formazan),生成的甲臜量與活細(xì)胞數(shù)量成正比.通過檢測450nm波長下的吸光度(OD值),可間接反映細(xì)胞增殖或毒性狀態(tài).相較于傳統(tǒng)MTT法,CCK-8無需溶解步驟 毒性低且靈敏度更高(可檢測低至1000個(gè)細(xì)胞).

二 實(shí)驗(yàn)步驟詳解

在CCK-8增殖實(shí)驗(yàn)中,精確的實(shí)驗(yàn)步驟是獲取可靠結(jié)果的關(guān)鍵.下面我們?cè)敿?xì)討論實(shí)驗(yàn)的核心步驟：

細(xì)胞種植處理細(xì)胞并確定合適的種植密度.通常,細(xì)胞需要在無菌條件下傳代,使用含有適當(dāng)抗生素的培養(yǎng)基以防污染.

種植密度應(yīng)根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)調(diào)整,確保細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)過程中能達(dá)到適宜的生長狀態(tài).一般推薦在每個(gè)孔中種植數(shù)千至數(shù)萬細(xì)胞,具體數(shù)字根據(jù)細(xì)胞的生長速率和實(shí)驗(yàn)的持續(xù)時(shí)間而定.

 

添加CCK-8試劑實(shí)驗(yàn)的下一步是添加CCK-8試劑.

在添加前,先按照說明書推薦的比例對(duì)試劑進(jìn)行稀釋. 

添加量通常是根據(jù)培養(yǎng)板孔的體積而定,例如,每個(gè)96孔板的孔中添加10微升試劑.添加試劑后,將培養(yǎng)板輕輕晃動(dòng)幾次,以確保試劑與培養(yǎng)基充分混合.

 

然后將培養(yǎng)板放回細(xì)胞培養(yǎng)箱中,根據(jù)細(xì)胞類型,孵育時(shí)間通常在1到4小時(shí)之間.

觀察與記錄

在孵育期間,重要的是保持培養(yǎng)箱的條件穩(wěn)定,并避免頻繁打開以減少溫度和濕度的波動(dòng).數(shù)據(jù)記錄是實(shí)驗(yàn)中至關(guān)重要的一步.

 

從培養(yǎng)板中取出后,應(yīng)立即使用酶標(biāo)儀測量吸光度.記錄每個(gè)孔的讀數(shù),注意任何異常值或可能的污染跡象.

三 數(shù)據(jù)處理與分析

在CCK-8實(shí)驗(yàn)中,數(shù)據(jù)處理與分析是揭示實(shí)驗(yàn)結(jié)果的關(guān)鍵步驟.以下是詳細(xì)的分析流程：

數(shù)據(jù)的讀取完成孵育后,使用酶標(biāo)儀讀取吸光度是第一步.確保酶標(biāo)儀校準(zhǔn)正確,設(shè)置適當(dāng)?shù)牟ㄩL（通常為450 nm）.將培養(yǎng)板放置在儀器中,儀器將自動(dòng)測量每個(gè)孔中的吸光度值.這些值反映了培養(yǎng)孔中細(xì)胞的活性,從而可以評(píng)估細(xì)胞的增殖情況.

數(shù)據(jù)分析獲取吸光度數(shù)據(jù)后,下一步是計(jì)算細(xì)胞存活率.將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的平均吸光度值進(jìn)行比較.細(xì)胞存活率可以通過以下公式計(jì)算：

（實(shí)驗(yàn)組吸光度 - 空白組吸光度）/（對(duì)照組吸光度 - 空白組吸光度）× 100%

使用圖表軟件如Excel或?qū)I(yè)統(tǒng)計(jì)軟件如GraphPad Prism,可以繪制出生長曲線,直觀展示細(xì)胞增殖趨勢.

結(jié)果解釋分析數(shù)據(jù)時(shí),重要的是評(píng)估實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性.檢查數(shù)據(jù)是否有異常值,比如意外的吸光度高值或低值,這可能表明操作錯(cuò)誤或污染.同時(shí),確保重復(fù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果一致性.數(shù)據(jù)一致性高通常表示實(shí)驗(yàn)操作穩(wěn)定,結(jié)果可靠.

另外,結(jié)果的生物學(xué)意義也需考慮,比如細(xì)胞反應(yīng)是否符合預(yù)期的生物學(xué)行為.通過這些步驟,不僅可以保證數(shù)據(jù)處理的精確性,還能深入理解實(shí)驗(yàn)結(jié)果背后的生物學(xué)意義,為進(jìn)一步的研究提供堅(jiān)實(shí)的數(shù)據(jù)支持.

四 注意事項(xiàng)與常見問題

常見問題及解決方案

試劑穩(wěn)定性：確保CCK-8試劑儲(chǔ)存于推薦的條件下,通常是避光冷藏.使用前務(wù)必檢查試劑是否有變色或沉淀現(xiàn)象,這可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性.

細(xì)胞污染：操作中應(yīng)始終保持無菌環(huán)境.使用無菌操作臺(tái)和經(jīng)過嚴(yán)格消毒的工具.如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞污染,應(yīng)立即丟棄受污染的細(xì)胞,并徹底清潔所有設(shè)備和工作區(qū)域.

實(shí)驗(yàn)技巧分享

均勻添加試劑：添加CCK-8試劑時(shí),使用多通道移液槍以保證每個(gè)孔中試劑量的一致性.輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)板,使試劑與培養(yǎng)基充分混合,避免產(chǎn)生氣泡.

 

準(zhǔn)確計(jì)時(shí)：設(shè)置明確的計(jì)時(shí)提醒,以確保所有孔的孵育時(shí)間一致,防止由于時(shí)間差異導(dǎo)致的數(shù)據(jù)偏差.

 

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