操作高靈敏elisa試劑盒要注意那些問題？

發(fā)布時間：2020/12/1 10:43:17      閱讀次數(shù)：1659

 正確操作是檢驗實驗的標(biāo)準(zhǔn),所以我們每一個步驟都至光重要,不可忽視,因為這關(guān)系到實驗成功的關(guān)鍵是否.為了更好的進行高靈敏elisa試劑盒實驗,下面給大家介紹一下操作高靈敏elisa試劑盒要注意那些問題.

1 吸取液體時速度不易太快,以免產(chǎn)生氣泡,吸取的量不夠準(zhǔn).

2 手工洗板時每次加入洗滌液后.應(yīng)靜置15～30s,不要將一個酶標(biāo)孑L中的洗滌液濺入另一酶標(biāo)孔中,防止交叉污染.甩去洗滌液后將酶標(biāo)板放在毛巾或吸水紙上拍干.

3 底物為TMB,避免與皮膚相接觸.終止液為2tool的濃硫酸具有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸皮膚.

4 加樣后及時放人孵箱,標(biāo)本較多時,要分批操作.按說明步驟嚴(yán)格控制操作時間,防止孵育時間人為延長,導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,難以清洗徹底.

5 作時必須戴手套,穿工作衣,嚴(yán)格執(zhí)行消毒隔離制度.

6 剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5 0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄.

7 同批號試劑組分不得混用.

8 洗滌時各孔均需加滿液體,防止孔口有游離酶不能洗凈.

9 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔,該孔不加任何試劑,只是zui后加底物溶液及2N H2SO4.測量時先用此孔調(diào)OD值至零.

10 要確保微量加樣器的準(zhǔn)確性,可以使用蒸餾水和電子天平進行確定（由于蒸餾水不含雜質(zhì),溫度環(huán)境為20%左右時,lmL的水可以看作是lg 200 L的水可以看作是0 2g）每一把微量加樣器都應(yīng)該將其zui高量程和zui低量程進行確定.

11 在使用微量加樣器時,吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭,即使吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液.

12 檢驗技師應(yīng)具備從事實驗室操作的基本素質(zhì)和實踐經(jīng)驗.能熟練操作實驗儀器 器械,具有一定總結(jié)和分析問題的能力,對實驗中出現(xiàn)的意外情況能及時妥善解決.

13 操作前仔細(xì)閱讀說明書,嚴(yán)格按照說明書要求進行規(guī)范化操作.不同批號的試劑不可混用.值得改進的地方,反復(fù)試驗確定成立后才能改進,比如洗板次數(shù)的掌握等.

14 評估試劑的實用性,試劑的穩(wěn)定與否,對準(zhǔn)確率的高低到頭重要.在試劑啟用前,應(yīng)進行陰 陽對照及樣品反復(fù)比照試驗,判定試劑符合要求后方可使用.

15 加樣要準(zhǔn)確 快速.加樣不準(zhǔn)確,酶生成物的量不能確定,直接影響顯色結(jié)果.另外,顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應(yīng)慎重.要求在一定時間內(nèi)加樣完畢的實驗,如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長時間暴露在外,尤其室溫過高時,保存期會縮短甚至失效.

16 使用校對過的微量移液器,排除自然誤差.移液器準(zhǔn)確與否對定量檢測尤為重要

17 嚴(yán)格掌握顯色時間,顯色時間過短,加入終止液反應(yīng)終止后,底物結(jié)合物的量過少,易出現(xiàn)假陰性.超過顯色要求時間后顯色,應(yīng)判為假陽性,這可能與試劑本身有關(guān).加顯色劑后立即顯色,不可報陽性,這可能是本底顯色的結(jié)果.

18 洗滌徹底,洗板不徹底,酶結(jié)合物本底顯色會呈現(xiàn)假陽性.另外,洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽性.

19 嚴(yán)控反應(yīng)時間,反應(yīng)時間過長,酶失活；反應(yīng)時間過短,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性.

20 ELISA檢測操作步驟復(fù)雜,可強各環(huán)節(jié)的質(zhì)量控制,才能得到準(zhǔn)確可靠的檢測結(jié)果.（內(nèi)容僅供參考,如有問題請來電咨詢,我們會竭誠為您服務(wù)）


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